Лабораторные методы диагностики

Иммуноблотинг

В Аллерго Клиник проводится лабораторная диагностика иммуноблотинг с использованием немецких реактивов RIDA® AllergyScreen. Панели 1, 2, 3, 4 Иммуноблот для проведения анализа специфических IgE в сыворотке крови человека.

Набор предназначен для in vitro диагностики, т.е. делается с использованием сыворотки человека. Он представляет собой тест для полуколичественного определения специфических IgE-антител к панелям индивидуальных аллергенов в сыворотке крови человека методом иммуноблота.

Всем аллергическим реакциям предшествует бессимптомная фаза первоначального контакта, во время которой образуются специфические иммуноглобулины класса Е (IgE-антитела). При повторном контакте с аллергенами,запускающими реакцию, эти IgE-антитела реагируют с аллергенами и приводят к высвобождению медиаторов (из тучных клеток или мастоцитов), таких как гистамин, лейкотриены, простагландины и т.д.,которые приводят к развитию симптомов аллергии. Когда имеется аллергическая реакция, аллергены,вызвавшие ее, могут быть установлены определением специфических IgE-антител в сыворотке крови.

Тест RIDA® AllergyScreen (панели 1, 2, 3, 4) основан на принципе иммуноблотинга. Специфические аллергены, соответствующие составу панели, нанесены на поверхность нитроцеллюлозных мембран (стрипов). IgE-антитела, специфичные к этим аллергенам, присутствующие в образцах пациентов, реагируют с антигенами, обеспечивая тем самым на второй стадии инкубации прикрепление антител к IgE человека, конъюгированных с биотином (проявляющие антитела), к полосам аллергенов на стрипах. Вовремя третьей стадии инкубации к биотину прикрепляется стрептавидин, конъюгированный с щелочной фосфатазой (конъюгат). Фермент превращает бесцветный субстрат (BCIP / NBT) в конечный продукт реакции сине-сиреневого цвета. Интенсивность синего окрашивания прямо пропорциональна количеству аллерген-специфических антител в сыворотке. Оценка результата производится на приборе RIDA® XScreen.

Уникальность иммуноблота заключается в его высокой информативности и достоверности получаемых результатов.

Данный метод исследования не имеет противопоказаний.

Чаще всего применяются 4 стандартные панели, каждая из которых содержит 20 аллергенов:

Панель № 1 (смешанная панель) — клещ домашней пыли I (Dermatophagoides pteronyssinus), клещ домашней пыли II (Dermatophagoides farinae), пыльца ольхи, пыльца берёзы, пыльца лещины (орешника), пыльца смеси трав, пыльца ржи, пыльца полыни, пыльца подорожника, эпителий и шерсть кошки, собаки, лошади, грибок Alternaria alternata, белок яйца, молоко, арахис, лесной орех — фундук, морковь, пшеничная мука, соя.

Панель № 2 (ингаляционная панель) — клещ домашней пыли I (Dermatophagoides pteronyssinus), клещ домашней пыли II (Dermatophagoides farinae), пыльца ольхи, пыльца берёзы, пыльца лещины (орешника), пыльца дуба, пыльца смеси трав, пыльца ржи, пыльца полыни, пыльца подорожника, эпителий и шерсть кошки, лошади, собаки, морской свинки, хомяка, кролика, грибок Penicillinum notatum, грибок Cladosporium herbarum, грибок Aspergillus fumigatus, грибок Alternaria alternata.

Панель № 3 (пищевая панель) — лесной орех, арахис, грецкий орех, миндаль, молоко, белок яйца, желток яйца, казеин (белок, составляющий основную массу творога), картофель, сельдерей, морковь, помидор, треска, краб, апельсин, яблоко, пшеничная мука, ржаная мука, кунжут, соя.

Панель № 4 (педиатрическая панель) — клещ домашней пыли I (Dermatophagoides pteronyssinus), клещ домашней пыли II (Dermatophagoides farinae), пыльца берёзы, пыльца смеси трав, эпителий и шерсть кошки, собаки, грибок Alternaria alternata, молоко, альфа-лактоальбумин, бета-лактоглобулин, казеин (белок, составляющий основную массу творога), белок яйца, желток яйца, говяжий сывороточный альбумин, соя, морковь, картофель, пшеничная мука, лесной орех — фундук, арахис.

Кроме того, в нашей клинике применяются уникальные панели, адаптированные под специфику Казахстана – с учтенными особенностями питания и пыльцы местных растений.

Помните о том, что перед проведением обследования желательно проконсультироваться с врачом для выбора оптимальной панели.

ИФА для определения общего и специфического иммуноглобулина Е

Определение общих и антигенспецифических антител иммуноглобулинов E позволяет обследовать больного в период обострения, когда он получает антигистаминные и кортикостероидные препараты, имеет высыпания на коже; у беременных с неспецифической кожной чувствительностью и т. д. В норме в крови здоровых людей содержится незначительное количество общего иммуноглобулина Е (20–120 Ед/мл). Показатель у страдающих аллергией значительно повышен. Это неспецифический маркер заболевания, который отражает степень общей аллерголизации организма. Определение антигенспецифических антител иммуноглобулинов Е позволяет выявить конкретные аллергены, на которые реагирует организм. Исследование иммуноглобулинов Е (общих и специфических антител) проводится на основе иммуноферментного (ИФА)

С помощью ИФА диагностики можно выявить наличие антител на:

• Бытовые аллергены
• Пыльцевые аллергены
• Эпидермальные аллергены
• Грибковые аллергены
• Консерванты и красители
• Пищевые аллергены
• Лекарственные аллергены
• Яд насекомых

Для диагностики аллергии большое значение имеет определение в крови концентрации IgE (иммуноглобулина Е).

Иммуноглобулин Е (IgE) — класс иммуноглобулинов, содержание которого в сыворотке крови в норме крайне мало. Концентрация IgE в сыворотке крови возрастает постепенно с момента рождения человека до подросткового возраста. У взрослых людей концентрация IgE в норме может достигать 100 МЕ/мл. В пожилом возрасте уровень IgE иногда снижается.

Продукция IgE имеет существенное значение в антигельминтозном иммунитете. При аскаридозе обнаруживается 15–20-кратное повышение концентрации IgE. Однако в развитых странах выявление повышенных концентраций IgE чаще связано с развитием аллергических заболеваний.

Определение общего IgE имеет важное прогностическое значение. Его уровень выше 95 % верхнего возрастного предела нормы выявляют у 75 % детей, родители которых имеют аллергические заболевания. Выявление высоких концентраций общего IgE в сыворотке крови позволяет дифференцировать аллергические заболевания с другими патологиями, клинически проявляющимися как астма, частые заболевания дыхательных путей, хронические риниты и дерматиты.

Повышение его содержания свидетельствует в пользу выработки организмом специфических антител против аллергенов окружающей среды.

Определение IgE проводится в сыворотке крови, забираемой у больного из вены. Метод основан на использовании смеси очищенных аллергенов, в присутствии которых антитела класса IgE связываются с ними и образуют комплексы антиген (аллерген)- антитело. Более тонкие лабораторные исследования позволяют выявить тип реакции и определить ее остроту.

В этом тесте можно выявлять чувствительность человека более, чем к 200 видам аллергенов.

В Аллерго Клиник проводиться можно определить Специфический Иммуноглобулин Е на следующие аллергены:

Список дисков аллергенов на 2017 год

Скачать список аллергенов

Кожные пробы

Кожные пробы являются информативным методом аллергологического обследования. Кожные пробы ставят целью подтвердить значимость в развитии болезни аллергенов, к которым, по данным анамнеза, предполагалась повышенная чувствительность, и выявить причиннозначимые аллергены, с которыми связь обострений болезни в анамнезе не прослеживалась. Кроме того, кожное тестирование позволяет выявить латентную сенсибилизацию организма к другим группам аллергенов, что важно для своевременной профилактики. Результаты кожных проб дают возможность оценить уровень сенсибилизации и определить показания к специфической иммунотерапии.

Положительные результаты кожных проб свидетельствуют о развившейся сенсибилизации организма, но не могут заменить данных аллергологического анамнеза и физикального обследования. Вынести суждение о причинной значимости тех или иных групп аллергенов можно лишь при совпадении результатов положительных кожных проб с данными анамнеза.

При интерпретации результатов кожных проб следует помнить о возможности ложноположительных и ложноотрицательных реакций. Ложноположительные реакции могут быть вызваны присутствующими в растворителе консервантами. В связи с этим контроль (проба с растворителем) при кожной пробе обязателен. Ложноположительные результаты кожных проб могут быть обусловлены использованием больбо ших концентраций аллергена и излишней травматизацией кожи.

Ложноотрицательные результаты кожных проб возможны при приеме антигистаминных препаратов. По этой причине обязательно делают кожную пробу с гистамином. Отрицательный результат кожной пробы может быть обусловлен и малой аллергенной активностью препарата.

Аллергены для кожного тестирования выбирают в соответствии с данными аллергологического анамнеза и физикального обследования. Возникновение аллергических проявлений в сезон цветения растений указывает на необходимость кожных проб с пыльцевыми аллергенами. Обострения бронхиальной астмы и аллергического ринита в течение всего года свидетельствуют о целесообразности кожного тестирования с аллергенами, присутствующими в жилых помещениях (аллергены домашней пыли, Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, эпидермальные аллергены). При выявлении атопического дерматита у детей раннего возраста требуется выяснение роли пищевой сенсибилизации. При проживании больного бронхиальной астмой в сырых помещениях проводят кожное тестирование с аллергенами плесневых грибов. Хронические очаги инфекции и связь обострений бронхиальнойтастмы у детей с этими очагами и интеркуррентными инфекциями свидетельствуют о целесообразности кожных проб с бактериальными аллергенами. Аллергическая патология у детей часто обусловлена поливалентной сенсибилизацией, поэтому в случаях аллергических заболеваний с круглогодичными обострениями показано кожное тестирование с пищевыми, пыльцевыми, эпидермальными аллергенами, а также с аллергенами домашней пыли, Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, плесневых грибов. Выяснение спектра сенсибилизации помогает правильно строить элиминационный режим и своевременно проводить специфическую иммунотерапию. При указаниях на возникновение симптомов аллергии только при контакте с домашними животными (кошкой или собакой), содержащимися в квартирах птицами показано прекращение контакта с ними. В таких случаях кожные пробы с эпидермальными аллергенами не обязательны. Необходимость в их проведении возникает при отказе родителей удалить животное или птицу из жилого помещения. Положительный результат кожных проб у детей помогает в некоторых случаях убедить родителей в необходимости этих мер.

Кожные пробы с пищевыми аллергенами недостаточно информативны. Положительный результат проб учитывается только при подтверждении анамнестическими данными и может быть полезным при составлении элиминационных диет.

Кожное тестирование проводится в период ремиссии аллергических болезней, после снятия их обострений. Не рекомендуется ставить кожные пробы при выраженных аллергических проявлениях и, в частности, при клинически определяемых симптомах бронхиальной обструкции у больных бронхиальной астмой. Для выявления причинно-значимых аллергенов можно применять скарификационные пробы, тест уколом, прик-тест, внутрикожные пробы. Скарификационные пробы, прик-тест в сравнении с внутрикожным тестом чувствительны, достаточно информативны, в большинстве случаев при этом не требуется проведение внутрикожного тестирования. Скарификационные пробы, тест уколом более безопасны по сравнению с внутрикожными пробами, хотя риск возникновения системных аллергических реакций существует при любом методе кожного тестирования, но при скарификационных пробах, тесте уколом он значительно меньше, чем при внутрикожных пробах.

Скарификационные пробы, тест уколом и прик-тест делают либо на передней поверхности предплечья, либо на коже средней части спины. Внутрикожные пробы ставят только на передней поверхности предплечья. Пробы ставятся на предварительно обработанном спиртом не поврежденном и не измененном воспалением участке кожи на расстоянии 3 см одна от другой. Одновременно делают пробы с 1% раствором гистамина, предназначенным для скарификационных проб, прик-теста, и 0,01% раствором для внутрикожных проб для положительного контроля, а также пробу с растворителем (отрицательный контроль). Для скарификационных проб, прик-теста используют 3-5% водные экстракты аллергенов, в которые часто добавляется глицерин. При выполнении этих проб на кожу наносят по 1 капле испытываемого аллергена.

Скарификационные пробы можно выполнять скальпелем, иглой или скарификатором. Делают насечки поверхностных слоев кожи длиной 0,3-0,6 см, не повреждая сосудов. Результаты кожных проб учитывают через 15-20 мин. Тестируемый участок осматривают через короткие промежутки времени. При появлении большой папулы на месте пробы аллерген с кожи немедленно удаляют.

Некоторые аллергены, в частности пищевые, при проведении проб могут вызывать неспецифические реакции раздражения кожи. Преимущество скарификационных проб состоит в более простой технике и возможности удаления аллергена в случаях развития выраженной кожной реакции.

Тест уколом выполняют стерильной иглой или острым специально отточенным прибором. Иглу вводят через каплю аллергена острием в поверхностные слои кожи. Тест при помощи укола или пункции считается в 5 раз более чувствительным, чем скарификационные пробы.

Разновидностью теста уколом является прик-тест, при котором после введения иглы под косым углом через каплю аллергена в поверхностные слои кожу приподнимают ее острым концом. Этот тест достаточно специфичен, его результаты коррелируют с данными PACT. В последние годы для выполнения прик-теста предлагается использовать покрытые аллергеном ланцеты (фазеты), при этом отдельно данная проба уже не ставится с жидкими экстрактами аллергенов. Результаты прик-теста с помощью фазет оценивают так же, как при выполнении этой пробы с использованием жидких экстрактов аллергенов: проба считается положительной при возникновении папулы диаметром 3 мм и более.

Не следует ставить одновременно более 15-20 кожных проб. Перед проведением проб необходимо выяснить, имелись ли в прошлом у больного системные аллергические реакции, соблюдалась ли маркировка аллергенов. Кожные пробы нельзя ставить больным, принимающим антигистаминные препараты и симпатомиметические средства, поскольку они тормозят развитие реакций, вызываемых гистамином и аллергенами. Пробы можно ставить лишь спустя 48 ч после приема этих препаратов. Интал и глюкокортикостероиды не влияют на выраженность кожных проб. Кожные пробы оценивают при сравнении кожной реакции с реакцией на введение контрольных веществ (гистамина и растворителя). Результат проб с аллергенами учитывается при положительной реакции на гистамин и отрицательной реакции на растворитель.

Патч-тест

Тру тест – это готовая к применению система для кожных проб на аллергический контактный дерматит. Тестирование проводится с помощью специальных пластин и является простой процедурой для диагностики дерматита и идентификации возбудителя. Тру тест может применятся для пациентов с: атипичными аллергическими симптомами; подозрением на контактный дерматит; дерматитом ног или ступней; экземой лица; дерматитом ног и ступней; дисковидным дерматитом; дорсальным дерматитом.

Тру тест спроектирован для оптимизации выявления аллергенов к коже и последующего выделения и организации результатов с несколькими раздражителями или ложноположительными реакциями:

• Готовые к использованию и строго дозированные аллергены.
• Пропитанные гелем аллергены для увеличения области действия.
• Гипоаллергенная липкая хирургическая пленка.

Как использовать тру тест
Тест должен проводиться на здоровой, чистой коже. Место для наложения пластин не должно содержать шрамов, угрей, симптомов дерматита или других дефектов, которые могут исказить интерпретацию результатов теста. Избегайте применение тру теста на местах недавно загоревшей или просто подвергнутой воздействию солнца коже, поскольку это может увеличить риск ложных проявлений. Если пациент проходил лечение ультрафиолетом или подвергался сильному воздействию солнца, то использовать тест нужно только спустя 3 недели. Старайтесь избегать чрезмерного потоотделения во время тестирования, чтобы сохранить спайку с кожей. Избегайте чрезмерной физической активности, чтобы не нарушить спайку пластины и предотвратить фактическую потерю материала кожной пробы. Старайтесь, чтобы пластины теста и пространство вокруг них были сухими.
Если на месте теста присутствуют волосы, то их необходимо удалить электрической бритвой (не используйте станки для бритья). Жирная кожа может быть очищена мылом с водой.

Пошаговая инструкция:

1. Откройте упаковку и отделите тестовую пластину (рис. 1)
2. Удалите защитное пластиковое покрытие (рис. 2). В это время не касайтесь тестовых веществ.
3. Разместите пластину 1.1 на спине пациента, как показано на рисунке 3. Аллерген номер 1 должен быть в верхнем левом углу. Не размещайте пластину на границе с лопаткой или сразу по-над позвоночником. Удостоверьтесь, что каждый квадратик с аллергеном тесно контактирует с кожей. Разгладьте аппликатор от центра к краям, так как указано для пластины 3.2 на рисунке 3.
4. Специальным медицинским маркером отметьте на коже местоположение двух прорезей пластины (как указано для пластины 3.2 на рис. 4).
5. Повторите процесс с пластиной 2.2. Установите пластину 2.2 около 2.1 на левой стороне спины пациента так, чтобы аллерген номер 13 был в левом верхнем углу. Нанесите пластину 2.2 в 5 см от средней линии позвоночного столба (рис. 3).
6. Повторите процесс с пластиной 3.2, разместите пластину на правой стороне спины пациента так, чтобы аллерген номер 25 был в левом верхнем углу. Накладывайте пластину 3.2 в 5 см от средней линии позвоночного столба (рис. 3).
7. При необходимости для улучшения адгезии, может быть использована соответствующая гипоаллергенная липкая пленка вокруг внешних краев пластины.

Предостережения
Тест проводится специалистом поскольку может наблюдаться анафилаксия.
Для одного или более аллергенов реакция может провялятся при первичном тесте, а может вывялятся только при повторном.
Тру тест может провоцировать крайне сильные, стойкие, положительные реакции, контактный дерматит и реакции с замедленным проявлением.

Побочные реакции
Большинство основных побочных реакций проявляется в виде жжения, раздражения кожи, эритемы, гиперпигментации или гипопигментации.

Могут ли результат тру тест быть ошибочными?
Точность результатов кожных проб зависит от типа аллергена и чувствительности вашей кожи. Сильные реакции точнее и легче интерпретируются, слабые часто ставятся под вопрос и их интерпретировать значительно сложнее, а иногда можно и вовсе упустить. Для некоторых результатов тру теста необходимо проводить повторные анализы. Если после того как доктор снял пластины и поставил диагноз, позже вы заметили покраснение или какие-либо изменения на коже, которых ранее не было, немедленно свяжитесь со своим врачом. Результат теста зависит и от состояния вашего здоровья, привычек и принимаемых лекарств. Сообщите доктору, если вы незадолго до тестов принимали стероиды или какие-либо лекарственные препараты. Также уведомьте его если пластины тру тест отставали или же намокали в процессе теста.

Тру тест учитывает все аллергены?
Нет. Тест позволяет проверить реакцию на 35 аллергенов (некоторые из них составные, всего 58 веществ), которые могут вызывать аллергический контактный дерматит у большинства людей. В общей сложности известно несколько тысяч аллергенов, которые не применяются в тру тесте и на которые у вас может быть аллергия. Основываясь на истории вашей болезни и роде деятельности, врач может назначить дополнительные анализы на специфические аллергены.

Список аллергенов тру теста
Ниже представлен полный список из 36 аллергенов используемых в тру тесте.